SspM I
Новосибирск
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
CTAG C↓TAG
GATC GAT↑C
Источник: Sporosarcina species M
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, способное гидролизовать 1 мкг λ-ДНК в 50 мкл реакционной смеси в SE-буфере Y при 55 С за 1 час. Активность при 37°С – 75% от исходной
Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер Y
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
B G O W Y ROSE
25-50 50-75 25-50 50-75 100 80
Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.6), 300 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 500 мкг/мл BSA, 0,01% Tритон Х-100, 7 мМ 2-меркаптоэтанол, 50% глицерин; Хранить при -20°С
Лигирование:
После гидролиза 3-кратным избытком фермента 5% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 4 ед. фермента в течение 16 часов при 55°С.
Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании CG-метилированием
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.